酶标仪应用双抗体夹心法，基于不同位点的两种单克隆抗-人钙卫蛋白抗体。标准品、质控品和稀释后的待测样本加入到具有高亲和力的单克隆抗-人钙卫蛋白抗体包被的微孔板微孔内。在*次孵育步骤中，样本中钙卫蛋白被固相抗体捕获。加入酶联物后第二次孵育时，形成以下复合体：捕获抗体-人钙卫蛋白-酶标抗体结合物。接着加入TMB底物进行显色，加入酸液终止液终止显色反应，溶液变成黄色。黄色亮度与样本中钙卫蛋白浓度成正比。zui后在酶标仪450nm波长处测量吸光度。做出标准品浓度对相应OD值的标准曲线，在其上计算出样本浓度。有些试剂盒厂家采用双波长检测，酶标仪450nm（单波长测量时使用450nm，如果zui高标准品的吸光度系数超过酶标仪的范围，应直接于450nm（参考630nm或620nm）双波长测量。
